臭氧发生器对物体表面消毒效果的评价

B.2.1 实验材料
(1) 菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 6538株，大肠杆菌杆菌8099和白色念珠菌ATCC 10231株。参照《消毒技术规范》第三版第一分册《实验技术规范》第2.1.3.1和2.1.3.3条制备悬液。
(2) 载体：根据推荐消毒的对象，选择合适的载体，可供选择的载体有：玻璃片、不锈钢片（或圈）、
塑料片、铝片、布片等。载体大小一般为1.0cm1.0cm。
GB  ××××－××××

(3) 稀释液和洗脱液：稀释液采用磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L,pH7.2）；洗脱液用含中和剂的PBS。
(4) 生物学指示物：将一定量的指示菌株悬液污染在灭菌载体上，待干燥后，进行试验。
(5) 采样规格板：5. 0cm5.0cm。
(6) 培养基:对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,采用普通营养琼脂培养基；对白色念珠菌，采用沙堡氏培养基。
B.2.2 实验室评价
(1) 将染菌载体(生物学指示物)放于臭氧消毒柜内，四角和中央各放一个，使其充分暴露。
(2) 关闭消毒柜。
(3) 开臭氧发生器，至柜内臭氧浓度达到要求时开始计时。
(4) 设定四个作用时间，每到一个作用时间，取出生物指示剂一个，放入含10ml洗脱液和20粒玻璃珠的小三角烧瓶内。
(5) 对洗脱液进行活菌计数：取其原液或适当稀释液0.5ml，接种于无菌平皿，倾入融化并凉至45℃琼脂培养基，摇匀，置恒温箱培养48小时。
(6) 对照样片除不暴露于臭氧外，其他处理方法同消毒组样片，对照组生物指示物为与消毒组同批的生物指示物，在同样温湿度下放致最长消毒时间后才开始洗菌。
    (7) 本试验重复三次，取其平均杀菌率。
（8） 结果分析
①杀菌率的计算
可用下述公式计算杀灭率：
 
②结论：每个位置生物指示物的平均杀灭率均达到≥99.9%，则可判定为消毒合格。
B.2.3 模拟现场试验
      (1)人工染菌实物为消毒试验对象，可选择油漆木板表面，陶磁砖表面，搪磁用具表面，陶磁用具表面等。
（2）染菌：取消毒试验对象5块进行灭菌处理，用沾有菌液的棉签对画出的试验区染菌（来回涂布，至菌液布满），在无菌环境中干燥后，进行试验。务使染菌量达到5×105～5×106/cm2。
（3）将染菌试验对象放臭氧消毒箱（或消毒柜）内最难达到消毒的部位，开启臭氧消毒器，作用至预定时间时，取出消毒试验对象，用沾有含中和剂的PBS棉签，用擦拭法（每区横竖往返各8次）采样。剪掉采样棉签头部棉花，使落入含5ml采样液的试管中，振打80次或放电动振荡器上振1分钟，吸取其原液或稀释液接种平皿，进行活菌计数。
（4）对照组采用同样方法采样、洗菌和培养，进行活菌计数，采样时间应与消毒组最后一个样本同时进行。
（5）结果分析：
杀灭率可用下述公式计算

GB  ××××－××××

结果判定：各次杀灭率和平均杀灭率均≥99.9％的作用时间，为最低作用时间。
本试验应重复三次。试验温度为20±2℃，相对湿度为70～80％。试验菌液中应加有50％血清。
B.2.4 现场试验
按照实际使用条件，以自然菌为试验微生物，以实际消毒物品为试验对象进行试验，检测样本数应≥30份。
（1）随机抽取消毒物品，用5×5cm2规格板选定对照区用沾有含中和剂的PBS棉签擦拭采样（横竖各8次），将棉签头剪入采样液试管内（含采样液5ml），振打80次或电动振荡1分钟。取其原液或稀释液，接种平皿，进行活菌计数，为对照组。
（2）将选定的消毒对象放入臭氧消毒箱内消毒至预定时间取出，用和对照组同样方法采样，洗菌，接种，培养，为试验组。
（3）结果分析
可用下述公式计算杀灭率：
 
结果判定：以每件样品消毒后的杀灭率均达到≥90％的作用时间，为合格消毒时间。
（4）注意事项：参照《消毒技术规范》第三版，第一分册5.4.7执行。